adcov.com

TMRE Protokół

TMRE Protokół


Tetramethylrhodamine etylu (TMRE) jest "powolne, lipofilnych, kationowy barwnik fluorescencyjny reditribution" stosowany w MitoPT ™ TMRE / TMRM Potencjał Kit Błony mitochondrialne oceny, produkowany przez Immunochemii Technologies, LLC. Proces pomaga zobaczyć transbłonowy gradient potencjału elektrycznego w komórkach.

Przygotowanie testu

Protokół ten jest prosty do wykonania, i trwa około 20 minut, aby przetwarzać w temperaturze 37 stopni Celsjusza. Żywe komórki stosowane w tym oznaczeniu może trwać od kilku godzin do kilku dni, aby przygotować do użycia. Komórki kontroli może potrwać kilka godzin na przygotowanie, ponieważ muszą być indukowane do apoptozę.

Protokół Część 1

Komórki hodowli do optymalnej gęstości dla indukcji apoptozy lub oksydacyjnego stresu, w zależności od konkretnego protokołu indukcji, ale nie przekracza 10 (6) komórek / ml.

Protokół Część 2

W tym samym czasie, hodowli bez wywołanej negatywna kontrola populacji komórek (przy tej samej gęstości, jako indukowanego populacji.

Protokół Część 3

Indukcji apoptozy lub celowo depolaryzacji mitochondria następujące żądanego protokołu.

Protokół Część 4

Przygotuj 1X / Wash probierczego bufora.

Protokołów Części 5 do 8

Przygotować 1 mm lub 0,2 mm MitoPT ™ TMRE / TMRM akcji. Protocol części 6 przygotować rozcieńczeniu 1: 100 w 1 mM, lub 1:20 rozcieńczenie roztworu 0,2 mM MitoPT ™ TMRE / TMRM dla domieszkowania w próbkach hodowli komórkowej.

Do protokołu Część 7, za pomocą komórki plam stężenie końcowe 20-200 Nm rozwiązania MitoPT ™ TMRE / TMRM.

Do protokołu Część 8, analizy danych.